1、应保证培养基厚度为4±0.5mm

2、Etest条应存储于放有干燥剂的-20℃冰箱的密封容器内，使用前应提前20分钟取出平衡至室温

3、0.5麦氏单位菌悬液制备，比浊仪应定期进行校准，至少每半年一次。制备菌悬液时，先使用空白无菌盐水调零再检测，从孵育18到24小时的血平皿等非选择性平皿上用无菌棉拭子调取3-5个形态相同的单个菌落，用0.85%的生理盐水制成菌悬液，将浓度调整至0.5麦氏单位。

4、如使用比浊管，按以上同样方法配置菌悬液，比浊前应先将标准比浊管颠倒混匀，然后与菌悬液并排置于黑白相间检测背景前进行比对

5、菌液配备完成后应在15分钟内接种，将无菌棉拭子先饱和吸收菌液，在靠紧管壁挤压出多余的水份，在琼脂表面化个米字后延三个方向均匀密涂，每次涂布将平皿旋转60度。最后再延平皿内圆涂抹一周。也可使用菌液旋转涂布仪将菌液涂布均匀，注意棉拭子移动速度不要太快，以免涂布时产生缝隙，涂布好菌液的平皿在室温下放置10～15分钟，使菌液吸收至琼脂表面干燥。

6、使用镊子将ETEST条贴在药敏平皿上，由于药物贴在平皿上后会立即扩散，所以一旦ETEST条贴在平皿上就不能再移动。ETEST条贴好后应在15分钟内将平皿倒置后放入摄氏35度孵箱进行孵育18-24小时

7、肺炎链球菌等苛养菌应在5%二氧化碳孵箱孵育；厌氧菌在厌氧条件下孵育；其他非苛养菌在普通孵箱孵育

8、孵育完成后取出平皿放于黑色背景下判读，读取抑菌圈与ETEST的试条的相交处刻度为菌株MIC，读取链球菌结果时应注意菌胎生长处结果，而不是溶血环处结果。